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    影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法

    发布时间: 2022-04-02  点击次数: 100次

    影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法

    ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定,具有灵敏度高,操作简略等优点,但是在详细实验过程中影响要素较多,而且要按照严厉的阐明要求,在临床检验中除正常反响外,有时常可见到一些错误成果(即假阳性或假阴性成果)。
    影响ELISA测定错误成果的原因主要有:
    标本要素;
    试剂要素;
    操作要素。
    一、类风湿因子
    人血清中IgMIgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合,然后导致假阳性。
    解决办法:
    1.Fab2替代完好的IgG
    2.标本用联有热变性(63℃10 minIgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用);
    3.检测抗原时,能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
    二、补体
    ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中,抗体分子发作变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 能够将二者连接起来,然后形成假阳性。
    解决办法:
    1.EDTA稀释标本;
    2.53℃10 min56℃30 min加热血清使C1q灭活。
    三、嗜异性抗体
    人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Igs) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能形成假阳性。
    解决办法:
    可在标本稀释液中加入过量的动物Igs),但加入量不足或亚类不同时无效。
    四、嗜靶抗原的本身抗体
    抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。
    解决办法:
    测定前需用理化方法将其解离后再测定。

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